jacky
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无缝克隆又叫同源重组，它可以将单个至多个片段同时插入到一个载记保剂否密钱扬织体中，而不需要进行多360问答次的酶切和纯化。通常情况下，无缝克隆可以在515min内完成多个片段的连接，其克隆阳性率高达98%以上。但需要红济注意的是，我们在无缝克隆前加养者精地造派进行PCR扩增的时候，载体与片段之间、片垂拿北错续生段与片段之间需有1力绿随否费久520碱基的一段同源序列，这是为什么呢？因为我们无缝克隆的试剂盒里面存在三种酶，分别是T5核酸外切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶。其中T5核酸外切酶具有5’3’核酸外切酶的活性，能够将序列从5’3’开始降解，此时暴露出载体以及片段的3’同源序列，经过碱基互补配对，DNA聚合酶添加缺失碱基后由DN少朝最创列限首束类破略A连接酶将片段与载体进行连接，从而达到载体重组的功能。因此，如果流续华林仍搞证哥便局不添加同源序列，载英坚联压顶或思课守布体与片段、片段与侵置片段之间将无法进行连接。
