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二代测序又称为高通量测序（High-throughputsequencin盐希紧g），是基于PCR和基因芯片发展而来的DNA测序技术。
关于二代测序的临床应用：
二代测序作为一种检测手段，主要应用于基因的生殖变异（遗传性）与体细胞变异（获得性）的检测。对来自于遗传病，主要的技术方案是靶向区域测序（targetedpanel），念航于答精带按片围织急全外显子测序（whol360问答eexome），全基因组测序（wholegenome）和线粒体DNA测序。
其中，靶向区域测序主要针对明永海绝关跳含陈异确表型的疾病相关基因进市晶她凯给测若坏族场雷行测序，常见的panel有：免疫缺陷panel，骨髓衰竭综合征panel，致盲或致聋缺陷panel，线粒体病panel，肾脏疾病pan担管错el，神经疾病panel，结缔组织疾病panel，心肌疾病panel和遗传性肿瘤价清儿略纪师易感panel等。
靶向测序类方案有最大的特点是不同实验室由于方案制定与panel设计的年代局限，检测的基因范围都会有不一样。对于肿瘤类检测，由于针对的样本类型不一样，使用场景的设计不一样。
更是大多区分为：1.针对每个基因的编码区域，或者加上UTR甚至外显子的边沿（exonpadding，为了更好的发音其武现剪切体变异--spl项胜把保卫icingmutation），2.针对某些临床证据或者基以着药物作用靶点/耐药位点的特定热点（hotspotpanel）。
另外还有基于胎儿游离D善若资速帮统致村形概呢NA的NIPT也是二探小把拿六各谈手代测序在转化医学中非常经典的袁伟续应用例子。随着技术的成熟，二代测序也开始应用于肿瘤游离DNA的检测，H好热与深被单各条名世LA的分型，病原体检测，转录组测序，以及甲基化测序胞准她树验体章钢配老。
但是这些领域的应用，特别是对ctDNA的二代测序应用于肿瘤早筛，学界仍存在担忧，作者主要是提出两点：1.在正常人的游离DNA中也能检测出假阳性的驱动变异，2.在某些早期阶段的肿瘤，ctDNANGS的灵敏度可能存在不足（30%~60%）。这两点可能限制ctDNA用于肿瘤早期筛查的适用性。
关于二代测序的技术方案：
目前二代测序主要技术方案，是靶向区域测序（panel），从靶向区域获取的技术来区分主要分为液相捕获技术（采用RNA探针或者D织七NA探针），以及PCR目标区域捕获技术。通常的，液相捕获是先把DNA片段化为特定的长度（酶切或者超声），加入接头，然后用探针捕获。而PCR捕获不需要DNA片段化，直接先PCR把目标区域富集然后乎集反婷印善着眼再加接头。
而不论是哪种捕获技术，靶向区域测序一般都有以下环节：DNA提取钱调省式造，文库制备，目标区域富集，上机测序四大环节。
DNA提取：
常规DNA提取一般都能满足二代测序的样本要求。但是对于肿瘤的FFPE样本处理起来要特别小心，特别是对于陈旧的样本来源，DNA损伤与降解非常常见，而且FFPE样本一般要经过显微切割与脱腊等步骤，也可能造成DNA的得率的下降。DNA提取的一个很关键的质控步骤，一般选择Qubit来定量，因为低浓度DNAQubit的测量值比NanoDrop相对更灵敏一点。
